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摘要　目的：通過試驗以確定碳酸氫鈉注射液可用細菌內毒素代替傳統的熱原檢查法。方法：用鱟試劑和家兔做對照試驗確定靈敏度。結果：用靈敏度為0.125 EU^.ml^－1的鱟試劑進行內毒素檢查比家兔靈敏度高12倍。結論：細菌內毒素檢查法可以代替熱原檢查法。
關鍵詞　碳酸氫鈉注射液；抑制/增強試驗；細菌內毒素試驗；熱原試驗

Study on BET in sodium bicarbonate injection with TAL

Zhao Xiaomeng(Zhao XM)， Yang Jiejiao (Yang JJ)， Zhu Yongquan(Zhu YQ)(The Quality-inspection Section of the Pharmaceutical Department in Shenzhen People′s hospital Shenzhen 518019)

ABSTRACT　OBJECTIVE:To determine whether bacterial endotoxins test(BET) can replace the pyrogen test for the sodium bicarbonate injection.METHODS:The comparative experiment of tachypleus amebocyte lysate(TAL) and rabbits were studied to determine the sensitivity.RESULTS:The sensitivity of TAL test was 0.125 EU^.ml^－1　WORDS, 12 times higher than that of using rabbits.CONCLUSIONS:BET may replace pyrogen test.
KEYsodium bicarbonate injection, inhibition/strengthen test, bacterial endotoxins test, pyrogen test

　　碳酸氫鈉注射液中國藥典1995年版二部、中國醫院制劑規范第2版均一直沿用家兔法進行熱原檢查。針對醫院制劑快速檢驗的特點，開展熱原檢查法有一定困難。我們根據鱟試劑用于藥品中細菌內毒素的檢測具有靈敏、快速、實用性強等優點，用細菌內毒素檢測法對碳酸氫鈉注射液中的細菌內毒素進行了檢測，并發現按細菌內毒素理論限值計算，此試驗濃度進行細菌內毒素檢查時存在假陰性反應。針對這一問題我們對碳酸氫鈉注射液能否用于細菌內毒素檢查法進行了考察，現介紹如下。

1　實驗材料和用具

　　鱟試劑(批號970702，標示靈敏度0.125 EU^.ml^-1，廈門鱟試劑廠)，細菌內毒素國家標準品(批號962，每支為7200 EU，中國藥品生物制品檢定所)，鱟試劑溶解水(BET，批號970624，每支為2 ml，廈門鱟試劑廠)，碳酸氫鈉注射液(批號970512，970612，970704，深圳市人民醫院制劑中心)，ZH—2旋渦混合器(天津藥典儀器廠)，試驗用家兔(新西蘭種，廣州試驗動物場)，所用試驗用具均經除熱原處理。

2　實驗方法與結果

2.1　供試品細菌內毒素的理論限值計算

　　按中國藥典1995年版，本品熱原注射劑量M=10 ml^.kg^-1，靜脈給藥時臨床無任何不良反應，細菌內毒素閾劑量K=5 EU^.kg^-1，理論限值為L=K/M=0.5 EU^.ml^-1。

2.2　鱟試劑靈敏度復核和樣品對鱟試劑抑制/增強試驗

2.2.1　鱟試劑靈敏度復核　按中國藥典1995年版二部方法進行。鱟試劑：批號970702，λ_b=0.125 EU^.ml^-1。
2.2.2　樣品對鱟試劑抑制/增強試驗　取溶解好的細菌內毒素國家標準品，用碳酸氫鈉注射液制成含內毒素0.5，0.25，0.125，0.0625 EU^.ml^-1 4個濃度。每一步均在漩渦混合器上混合30 s，將鱟試劑20管排列成5列，其中4列分別加入供試品陽性對照0.1 ml，另一列為陰性對照與鱟試劑混合，于37℃水浴中60 min觀察。結果表明供試品在0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125 EU^.ml^-1濃度下存在抑制作用，見表1。

表1　鱟試劑和供試品抑制/干擾試驗

　　取碳酸氫鈉注射液樣品，稀釋成1∶4，1∶6，1∶8，1∶10，1∶12的濃度，混合均勻取0.1 ml加入到含有0.5，0.25，0.125，0.0625 EU^.ml^-1細菌內毒素的鱟試劑中，37℃水浴1 h觀察，結果見表2。經實驗結果表明，碳酸氫鈉注射液濃度在1∶6或以上時，對鱟試劑有抑制作用；在1∶8以下時，沒有抑制作用；故碳酸氫鈉注射液最高非抑制濃度為1∶8，試驗濃度為1∶10。試驗結果見表2。

表2　供試品的最高非抑制濃度試驗

　　選取3批樣品進行干擾試驗，用1∶10的供試品將每支為10 EU細菌內毒素工作標準品制成
0.5，0.25，0.125，0.0625 EU^.ml^-1 4個濃度，測試1∶10試驗濃度下對鱟試驗的干擾情況。其結果表明，3批碳酸氫鈉注射液樣品對鱟試驗均未出現抑制或增強。

2.5　家兔法和鱟試驗法比較

2.5.1　用鱟試劑溶解水，將國家標準品962，每支為7200 EU稀釋成適當濃度，加至碳酸氫鈉注射液中，使之制成含內毒素1.0，1.2，1.5 EU^.ml^-1的溶液，分別按熱原檢查法和細菌內毒素檢查法對各種濃度的內毒素溶液進行檢查。試驗結果表明，樣品內含1.0，1.2 EU^.ml^-1的內毒素均未引起家兔反應，內毒素標準品在劑量為1.5 EU^.ml^-1時可致家兔明顯發熱反應，而這3種濃度下的鱟試驗法均為陽性反應。結果見表3。通過試驗表明，細菌內毒素法在內毒素濃度為0.125 EU*ml^-1時鱟試劑已凝集，按兩種方法產生實驗反應時內毒素濃度之比1.5/0.125=12，即確定內毒素法靈敏度是熱原法的12倍。

表3　熱原法和細菌內毒素法的比較

注：①按家兔10 ml/kg劑量注射。②實驗時室溫為26℃，室內無任何干擾

3　討　論

3.1　碳酸氫鈉注射液的PH為7.5～8.5左右。將原液或1∶2溶液加入鱟試劑中后，出現白色混濁。通過抑制試驗表明，對鱟試劑的凝集反應產生強烈干擾，出現假陰性；在濃度1∶8時，則無干擾。

3.2　碳酸氫鈉注射液按最大有效稀釋倍數D=L/λ計算應稀釋4倍，但經最高非抑制濃度試驗表明，在此濃度下仍有干擾，故加大稀釋倍數。通過抑制/增強試驗表明，將碳酸氫鈉注射液樣品1∶10稀釋后，用標示靈敏度0.125 EU*ml^-1的鱟試劑檢測樣品細菌內毒素時，無抑制/增強作用。

3.3　經試驗表明，細菌內毒素法比家兔法靈敏度高12倍，即碳酸氫鈉注射液用細菌內毒素檢查法可以代替熱原檢查法。

作者單位：趙曉萌　楊戒驕　朱永泉 (深圳518019深圳市人民醫院藥學部質檢室)

(收稿：1998-04-06)