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血友病A是常見的遺傳性凝血障礙，它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能異 常的致其發(fā)病率改為1/1000男性，女性患者極為少見.在臨床上，血友病大都有家族 史，亦有約20～30%的患者為散發(fā)病例，為新生基因突變所致. 一、血友病的遺傳學(xué) 本病為X連鎖隱性遺傳病，其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ)基因全長約為186Kb， 包括26個外顯子和25個內(nèi)含子，其mRNA全長約為9Kb，CDNA占為9009bp.其翻譯產(chǎn)物為 2351個aa殘基的多肽鏈.在FVⅢ基因內(nèi)含有多個酶切位點，在其翻譯區(qū)尚有VNTR序列 及(CA/n重復(fù)序列. 二、FVⅢ基因突變的特點 (一)大范圍的缺失，重排，重復(fù)及括入僅點血友病A的5% (二)FVⅢ基因突變的主要類型為單堿置換所引起的點突變，目前還發(fā)現(xiàn)的單堿是 置及在八十種以上，幾乎涉及FVⅢ的所有外顯子和部分內(nèi)含子. 三、PCR技術(shù)在血友病A基因產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用 FVⅢ基因突變以點突變?yōu)橹?，而且有高度異質(zhì)性，因此對患者的診斷10前還是主 要依據(jù)臨床表現(xiàn)進行，在一個家系內(nèi)若要進行血友病A的產(chǎn)前診斷，則必須用連鎖分 析的方法，該方法的應(yīng)用則必須滿折方法有以下兩種: (一).PCR-RFLP 在因子組基因內(nèi)及其復(fù)側(cè)有多組RFLP位點可用為標記進行連鎖分析進行產(chǎn)前診 斷，常用的PCR-RFLP位點有兩種，其引物序列，酶切片段多者情況見下表.
(二)，Amp-FLP 在FVⅢ區(qū)內(nèi)尚有兩個VNTP區(qū)，一個位于DXS52，另一個為(CA)n位于DX102內(nèi)，它 仍均具有復(fù)雜的多者性，亦可用于連鎖分析，是引物及擴增產(chǎn)物的多者性見下表
(三)血友病APCR基因診斷程序 1.母親、先證者的RFLP及Amp-FLP，確定風(fēng)險染色體 2.檢測胎兒性別(SRT) 3.檢測胎兒的RFLP及AmP-FLP 四、散發(fā)病例FVⅢ基因突變的PCR檢測 由于因子FVⅢ的基因突變以點突變?yōu)橹?，而且具有高度特異性，因此，單獨網(wǎng)點 突變的檢測方法仍以診斷，對于形發(fā)病例來說，可用PCR-SSCP，PCR-DGGE及其它的點 突變是篩查方法確定點突變血友病A之間的關(guān)系具有重要意義，尤其是PCR-DGGE已用 于血友病A基因點突變的篩查. |
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