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生物知識

細菌的培養

作者:admin 來源:網絡 發布時間: 2013-07-20 13:41  瀏覽次數:
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一般的細菌都可以用人工的方法進行培養,以研究它們的各種生物學特征或制備菌苗。培養細菌時,除采用合適的培養基外,還要供給一些必要的培養條件,如溫度、氣體等。
1.  進行活化的話是用斜面好還是放液體培養基搖瓶好呢?保藏的話用多少濃度的甘油?
1.1  斜面和平板活化與液體活化都可以,斜面較好,但液體活化如果時間控制得好,不會造成傳代多的現象。
1.2  基因工程酵母的保存方法:與野生菌一樣,要用甘油保藏的話,最好是在對數期,一般搖床培養20小時左右,過夜培養后保藏就可以。可將酵母菌在液體培養基培養3~5天,然后與100%甘油1:1混合凍存即可.即甘油濃度50%。
2.  菌體不生長
2.1  先查培養條件。溫度很關鍵, 校正一下溫度計是否正常指示;還要其他條件(濕度,搖床轉速等)。
2.2  查原材料。尤其是原材料的保存問題,最好在4度冷藏。
2.3  查菌種
2.4  如果長得慢,加大接種量看一下。
2.5  消毒有沒有問題
3.為什么會發生菌體自溶?發生菌體自溶會讓發酵參數發生什么變化
自溶和培養條件有關系,比如PH突然變化會引起菌體滲透壓的變化導致自溶,還有溫度的影響等;一般來說菌體也有自己的生存時限(依培養物變化而變化),也會產生自溶。
3.1  控制條件不好,PH和溫度不適合溶氧太低使菌體生長異常,產生溶菌酶自溶;
3.2  營養條件不好,營養跟不上,碳源不足自溶;
3.3  菌體衰老自溶,菌種培養時間過長,造成老化。改換酵母粉,增加一些生物素及微量元素可以消除自溶的問題;
3.4  過早的表達產物往往會對細胞產生毒害作用,使宿主菌的比生長速率下降甚至使細胞死亡、自溶;
3.5  感染噬菌體   
發生菌體自溶現象:pH升高,溶氧升高,氨氮回升,鏡檢時菌體空、碎
4.  培養基組分對芽孢桿菌產生芽孢的影響
一般加入Mn離子有助芽孢形成,另外培養基中注意磷酸鹽含量不要太高了,高了不利于形成芽孢的。Mn的濃度大概在5-50ppm之間。
5.  質粒小量提取之細菌的培養及收集
將含有質粒菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24h。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml  Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。

 

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