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趙裕棟，周俊，何璟 * 華中農業大學農業微生物學國家重點實驗室，武漢430070 摘要:【目的】土壤中未培養微生物約占總量的99%，這就意味著絕大多數微生物資源還未得到開發和利用。本研究通過優化土壤微生物總DNA的提取方法，獲得較高質量的DNA，為后期研究土壤微生物的多樣性及構建大插入片段的宏基因組文庫奠定基礎。【方法】通過綜合比較已報道的微生物DNA提取方法的優缺點，我們設計出一種新的提取方案。對提取過程中的幾個關鍵步驟進行了優化，包括聯合使用SDS-CTAB和溶菌酶一起來破細胞，利用氯仿除蛋白，使用PVPP柱純化DNA等。比較分析了優化后的方法和3種已報道方法所獲得的土壤總DNA的產量、純度及片段大小。【結果】優化后的方法所獲得的土壤DNA質量明顯有所提高:每克土壤最高能提取95 gDNA，A260/A280和A260/A230比值更接近理想水平，PCR擴增能夠得到明顯的目標條帶，DNA片段最大能達到100kb左右。【結論】通過比較分析，最終確立了一種較理想的土壤微生物總DNA提取方法，為更好地開發利用土壤未培養微生物資源提供了有力工具。
關鍵詞:土壤微生物，eDNA抽提，DNA的產量及質量，PCR擴增，大片段DNA 中圖分類號:Q93-3 文獻標識碼:A 文章編號:0001-6209(2012)09-1143-08
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基金項目:國家自然科學基金(30800020，30970059) ;教育部留學回國人員科研啟動基金項目(［2009］1590) ;教育部新世紀人才支持計劃項目(NCET-08-0779) ;中央高校基本科研業務費專項資金項目(2009PY006) * 通信作者。Tel: +86-27-87280163;E-mail:hejingjj@mail． hzau． edu． cn 作者簡介:趙裕棟(1986－) ，男，江西省九江人，2009級碩士研究生，研究方向為土壤微生物宏基因組學。E-mail:zyd3894816@yahoo． cn 收稿日期:2012-03-31;修回日期:2012-05-11
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