本人現在在做酵母雙雜,將AD和BK的載體導入后,在二缺板上長了,然后想在二缺液中搖起來點四缺板,但是酵母聚集成了球狀,不是分散的,有哪位見過這種情況??急求
建議參考德國的酵母雙雜交系統
特點和優點:
1. 可以篩選不同蛋白-蛋白之間相互作用的強度;
2. 利用銅誘導的CUP1/ACE1系統能更有效的檢測體內蛋白相互作用;
3. 利用銅抗性這種嚴格的篩選,會出現很少的假陽性;
4. 利用GFP這種綠色熒光蛋白的報告基因,篩選陽性菌株可以節省大量的時間;
5. 篩選陽性菌株不需要外部酶底物,如X-Gal;
6. 適合高通量的篩選分析。
產品介紹:
酵母雙雜交系統是一種用于篩選體內蛋白-蛋白之間相互作用的方法,它依賴于DNA結合結構域和DNA激活結構域的分離,并將這兩個結構域基因分別與兩個蛋白基因融合在一起,如果兩種蛋白能夠相互作用,就會使這兩個結構域重組成一個有活性的轉錄因子復合物,這樣,就會使報告基因得以表達。
MoBiTec的ACE1雙雜交系統是一個強大的工具,它可以用于新基因的發現和功能分析,而且可以有效的鑒別體內蛋白-蛋白的作用。它將銅誘導的轉錄因子ACE1和銅抗性CUP1基因與作為報告基因綠色熒光蛋白GFP基因結合起來。兩種相互作用的蛋白分別與ACE1的DNA結合結構域和DNA激活結構域相融合,從而使我們可以通過下面的方法篩選:1.在含銅的培養基上生長的細胞;2.依賴銅表達的強熒光GFP可以通過紫外光檢測到。
因此,這種新技術,可以很有效的通過一步法篩選可能的陽性表達,即在含有銅的培養基上生長并發出綠色熒光的菌株。它是一種快速、高靈敏度和更值得信賴的檢測方法。不斷改變銅濃度還可以篩選出不同蛋白之間相互作用的強度。
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