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1培養細胞時應使用5%或10%CO2? 一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為PH緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時。則應使用5%CO2培養細胞。(配置培養基時,如果攪動過多會使 NaHCO3轉變為氣體而丟失,使培養基的PH緩沖能力下降。)
2何時須更換培養基 視細胞生長密度而定,撲滿皿或瓶即可更換培養基即可。
3 培養基中是否須添加抗生素?
除于特殊篩穿系統中外,一般正常培養狀態下,培養基中不應添加任何抗生素。
4欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉速? 欲回收動物細胞,其離心速率一般為300g(約1000rpm),5-10分鐘,過高之轉速,將造成細胞死亡。
5細胞冷凍培養基之成份為何? 動物細胞冷凍保存時最長使用的冷凍培養基是含5-10%DMSO和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成。
6DMSO之等級和無菌過濾之方式為何? 冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grand之DMSO,基本身即為無菌狀況,第一次開瓶后應立即少量分裝與無菌試管中,保存于4度,避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質,并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,則需使用耐DMSO之Nylon材質濾膜。
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