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· 使用 CRISPR/Cas9 進(jìn)行基因組編輯概述
· 慢病毒試劑
· TransIT®-LT1 廣譜轉(zhuǎn)染試劑
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Ideal for Recombinant Lentivirus Production
TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
重組慢病毒顆粒概述及靶細(xì)胞感染。
(1) 用編碼目的基因，水泡性口炎 G 蛋白 (VSV-G) 和必需病毒蛋白（例如 gag，pol 和 rev）的 3-4 種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染生產(chǎn)細(xì)胞（例如 293T）。(2) 通過用生產(chǎn)細(xì)胞質(zhì)膜出芽組裝病毒并釋放到上清液中，得到用 VSV-G 修飾的包膜。將含有病毒的培養(yǎng)基通過 0.45 μm 過濾器過濾以除去任何細(xì)胞。(3) 靶細(xì)胞經(jīng)常在聚陽離子存在下用重組慢病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)，以增加聚集和攝取。病毒進(jìn)入細(xì)胞，衣殼未被包裹，顯示 RNA 基因組和病毒酶。病毒 RNA 被逆轉(zhuǎn)錄成 DNA，然后整合到宿主基因組中。(4) 轉(zhuǎn)錄和翻譯導(dǎo)致由目的基因編碼的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。
具有 TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑的高功能滴度。
將粘附的 293T/17 細(xì)胞用 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染到 6 孔板中，用 MISSION™ （1:1 比例，2μg/孔）驅(qū)動的慢病毒包裝混合物用以下試劑轉(zhuǎn)染：TransIT®-Lenti（3:1，體積重量比），Lipofectamine® 2000 (3:1)，Lipofectamine® 3000 (3:1:1)，25 kDa PEI (6:1) 或 CaPO4 沉淀（4 μg pDNA） /孔）。收獲上清液，過濾 (0.45 µm)，并使用 293T/17 細(xì)胞滴定。在 8 μg/ml TransduceIT™ 存在下進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，并使用 Guava easyCyte™ 5HT 流式細(xì)胞儀在轉(zhuǎn)導(dǎo)后 72 小時測量 GFP 表達(dá)。誤差條表示單獨滴定的一式三份轉(zhuǎn)染復(fù)合物。使用具有少于 20% GFP 陽性細(xì)胞的病毒稀釋液計算功能滴度。
使用 TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行高效轉(zhuǎn)染。
使用 TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑（3:1，體積重量比），使用 MISSION™ 載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 轉(zhuǎn)移載體和慢病毒包裝混合物）以 6 孔板形式轉(zhuǎn)染粘附的 293T/17 細(xì)胞。轉(zhuǎn)染 48 小時后，使用 Guava easyCyte™5HT 流式細(xì)胞儀檢測 GFP 效率。誤差條代表五個轉(zhuǎn)染復(fù)合物。使用 Zeiss Axiovert S100 倒置熒光顯微鏡在轉(zhuǎn)染后 48 小時（10 倍物鏡）捕獲圖像。觀察到的細(xì)胞變圓和細(xì)胞 - 細(xì)胞融合是由于水泡性口炎病毒 G 蛋白 (VSV-G) 的高表達(dá)，用于對重組慢病毒進(jìn)行假型化。
慢病毒生產(chǎn)可放大。
使用 MISSION™ 載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 轉(zhuǎn)移載體和慢病毒包裝混合物（1:1 比例））以及 TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑（3:1，體積重量比），以 12 孔、6 孔板或100 mm 平板形式轉(zhuǎn)染粘附的 293T/17 細(xì)胞。收獲上清液，過濾 (0.45 µm)，并使用 293T/17 細(xì)胞滴定。在 8 μg/ml TransduceIT™ 存在下進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，并使用 Guava easyCyte™ 5HT 流式細(xì)胞儀在轉(zhuǎn)導(dǎo)后 72 小時測量 GFP 表達(dá)。誤差條表示單獨滴定的一式三份轉(zhuǎn)染復(fù)合物。使用具有少于 20% GFP 陽性細(xì)胞的病毒稀釋液計算功能滴度。
使用 TransIT®-Lenti 進(jìn)行無濃縮慢病毒的高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
使用 MISSION™ 載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 轉(zhuǎn)移載體和由 MISSION™ 提供支持的慢病毒包裝混合物），利用 TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑（3:1，體積重量比）或 Lipofectamine®2000 生產(chǎn)慢病毒。收獲上清液，過濾 (0.45 µm)，并冷凍。利用 iCell®MotorNeurons (Cellular Dynamics International) 鋪板后 5 天進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。對于 TransIT®-Lenti 和 Lipofectamine® 2000，在 96 孔板的每個孔中加入 1 微升未濃縮的上清液。使用 guava easyCyte™ 5HT 流式細(xì)胞儀在轉(zhuǎn)導(dǎo)后 72 小時測量 GFP 效率。誤差條表示重復(fù)孔的 SEM。(B) 將 iCell® 運(yùn)動神經(jīng)元接種于 Ibidi 35 mm 培養(yǎng)皿中，并用使用 TransT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑和 MISSION™ 載體生產(chǎn)的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。使用 Zeiss Axiovert S100 倒置熒光顯微鏡，使用 63 倍浸油物鏡，在轉(zhuǎn)導(dǎo)后 72 小時捕獲圖像。
特性
· 高性能 – 提供高達(dá)八倍的功能滴度
· 簡便的實驗方案 – 無需更換介質(zhì)，單一收獲物
· 無動物源性成分 – 高性能可靠性
描述
· TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑旨在增強(qiáng)包裝和轉(zhuǎn)移載體向貼壁 HEK293T 細(xì)胞類型的傳遞，并增加重組慢病毒的產(chǎn)生。
· 包裝質(zhì)粒包括慢病毒基因組的結(jié)構(gòu) (gag)、酶 (pol)、包裝 (rev) 和包膜 (VSV-G) 等基本病毒組分。該轉(zhuǎn)移質(zhì)粒編碼目的基因，其兩側(cè)是長末端重復(fù)序列 (LTR)，以及 RNA 包裝信號(Psi) 和 rev 響應(yīng)元件 (RRE) 等其他必要成分。
重組慢病毒生產(chǎn)概述
訂單信息
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訂單號
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描述
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數(shù)量
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價格
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數(shù)據(jù)表
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MIR6603
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TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
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0.3 ml
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MIR6604
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TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
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0.75 ml
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MIR6600
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TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
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1.5 ml
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MIR6605
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TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
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5 x 1.5 ml
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MIR6606
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TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
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10 x 1.5 ml
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MIR6620
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TransduceIT™ 轉(zhuǎn)染試劑
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1 ml
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MIR6610
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TransIT®-Lenti 轉(zhuǎn)染試劑 -
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0.1 ml 樣品
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